将人胚胎干细胞分化成角膜上皮祖细胞的新方法!

来源:作者:时间:2017-09-06点击量:4291
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导读:山东大学齐鲁医院眼科系的Zhang C近日在PLoS One上发表了他们一项重要的工作,他们开发了一种将人胚胎干细胞(hESCs)分化为角膜上皮祖细胞(CEPC)的新方法。

在治疗角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)方面,以使用干细胞为代表的细胞疗法取得了重大突破。因此,他们想在不同二氧化碳(CO2)水平下,使用由DMEM / F12和角质化细胞无血清培养基(KSFM)1:1混合的培养基,寻找一种将人胚胎干细胞(hESCs)分化为角膜上皮祖细胞(CEPC)的新方法,使得诱导分化来的角膜上皮祖细胞与原代培养的人角膜缘干细胞(LSC)具有相似的特征。

他们经过试验发现,在5%,7%和9%CO 2条件下,诱导分化的细胞表现出与角膜缘干细胞相似的形态,并表达角膜缘干细胞的标记蛋白ABCG-2和p63。然而有趣的是,CK14仅在7%和9%的CO 2条件下培养的细胞才表达。通过定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析发现,7%的CO2和9%的CO2条件下诱导分化的细胞中ABCG2,p63和CK14表达水平均高于5%CO2条件下诱导分化的细胞,也都高于未分化的hESCs组(p < 0.05)。在分化第6天,ABCG2和p63在7%CO2培养的细胞中出现表达的最高峰值。蛋白质印迹试验发现,在7%CO2和9%CO2组中,ABCG2和p63水平在分化第6天其表达水平均高于其他时间点。ABCG2和p63的最高蛋白表达水平是在7%CO2条件下进行分化的细胞中。通过免疫荧光染色试验发现,在分化细胞中检测到神经细胞特异性标记微管蛋白β3和表皮标记物K1 / 10。因此,他们通过荧光激活细胞分选(FACS)进行细胞分选,分离ABCG2阳性细胞作为角膜上皮祖细胞(CEPC)。通过空气培养,分选的细胞形成三至四层上皮样细胞,并表达ABCG2,p63,CK14和CK3。

因此,他们认为,7%CO2调节的新型感应系统可能是角膜上皮祖细胞(CEPC)分化的高效的可行方法。这项工作为临床治疗角膜缘干细胞缺乏症提供了高效的细胞制备方法。

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